RD-Biotech propose tout un panel de services sur mesure sur sa plateforme de protéines recombinantes. En vous adressant à RD-Biotech, vous allez :
RD-Biotech propose des prestations standards mais également des stratégies sur mesure adaptées à votre cahier des charges. Nos experts sont à votre écoute afin de définir la meilleure des stratégies, pour optimiser le développement de votre projet, en termes de délais et de coût.
Plateforme d’expression des protéines recombinantes :
UNE OFFRE MULTI-SYSTEME
Service d’expertise et étude de faisabilité in silico
Etude de configuration de séquences, structure protéine, analyse de prédisposition d’expression de la protéine, biologie structurale (Spectrométrie, Dichroïsme, Biacore…)
Construction du vecteur d’expression
Dans le cas où vous ne disposez pas du vecteur d’expression, nous proposons le design et le clonage du vecteur adapté et optimisé pour le système d’expression souhaité.
Étude de faisabilité
Pilote d’expression et pilote de purification, tests de différentes conditions d’expression (évaluation de différentes souches ou lignées cellulaires en parallèle, test de différents milieux de culture, conditions de température, …) : détermination des conditions optimales et du rendement d’expression, analyse des résultats et fourniture d’un rapport
GO / NO GO du client pour une production large scale
Production et purification de la quantité souhaitée
Contrôles qualité
- Contrôles standards : SDS PAGE, électrophorèse en gel d’agarose, spectrophotométrie
- Contrôles supplémentaires selon la demande : ELISA, Western blotting, Cytométrie, Endotoxines, Host Cell Proteins, tests d’activité…
Fourniture du lot de protéine purifiée
accompagné du rapport de production / purification et des contrôles qualité (tampon, concentration, aliquotage)
LA QUALITE RD-BIOTECH
- Systèmes de production optimisés et adaptés à vos applications : systèmes bactériens, mammifères, levures et système acellulaire.
- Offre « expression en multi-systèmes » : Possibilité de tester différents systèmes d’expression en parallèle.
- Plateforme de biologie moléculaire pour un service complet, de la construction du vecteur d’expression jusqu’à la fourniture de la protéine purifiée et contrôlée
- Qualité R&D et qualité « endofree »
- Capacité : production de lots pilotes et production large scale (jusqu’à plusieurs centaines de mg selon le système)
- Rapidité : Fourniture de lots purifiés et contrôlés en moins de 3 semaines.
Bioproduction
Expression de protéines recombinantes en système E. coli
- Une expertise en bactériologie de plus de 20 années, appuyée par l’expertise du groupe mAbexperts
- Le système procaryote E. coli offre le meilleur compromis entre Rendements d’expression et Coûts de réalisation.
- Un ensemble de tests complémentaires au process standard, pour optimiser le rendement et la qualité des protéines produites et purifiées.
Capacité de production en scale up : de quelques mg jusqu’à plusieurs centaines de mg
- Synthèse du gène d’intérêt (si besoin)
- Sous-clonage dans le vecteur d’expression. Criblage.
- Contrôle par séquençage.
- Amplification et contrôles qualité
- Étude pilote basée sur des volumes de culture de quelques dizaines de ml
- Contrôle des protéines induites par électrophorèse sur gel SDS-PAGE
- Contrôle par Western-Blotting (anticorps anti-tag ou anticorps spécifique)
- Purification des protéines par chromatographie d’affinité sur Nickel Agarose (HIS tag) (autre méthode possible, nous consulter)
- Contrôle qualité : Contrôle de la protéine purifiée par électrophorèse sur gel SDS-PAGE et dosage protéique
Si besoin : Tests complémentaires d’expression :
- Transformation de différentes souches bactériennes
- Sélection des meilleurs producteurs
- Tests de différentes conditions d’expression (type induction, température…)
- Tests de renaturation
- Tests de solubilisation …
Go No Go
Capacité de production en scale up : pour des lots Recherche (lots de quelques mg jusqu’à plusieurs centaines de mg)
- Production en plus gros volume
- Purification par chromatographie d’affinité sur Nickel Agarose (ou autre méthode)
- Contrôle de la protéine purifiée par électrophorèse sur gel SDS-PAGE et dosage protéique
- Option : Elimination du tag
- Possibilité de concentration, d’aliquotage, lyophilisation, conjugaison…
- Conditionnement et envoi de la protéine, transport en carboglace, accompagné du rapport
Expression de protéines recombinantes en cellules mammifères CHO, HEK293
- Large expertise sur de nombreuses lignées cellulaires : cellules adhérentes et cellules en suspension
- Système permettant une conservation de la structure native et des modifications post traductionnelles
- Système permettant une évaluation simple et rapide de l’expression de la protéine par transfection transitoire
- Étude pilote en flasques ou en plaques de culture sur de petits volumes de culture
- Contrôle des protéines exprimées : Western-Blotting, ELISA, cytométrie de flux…
- Purification des protéines : différents systèmes proposés, dépendant de la protéine (purification par chromatographie d’affinité,… )
- Contrôle par Western-Blotting (anticorps anti-tag ou anticorps spécifique) et gel SDS-PAGE
Capacité de production en scale up :
- de quelques ml jusqu’à plusieurs centaines de litres de surnageant par lot
- de quelques millions jusqu’à plusieurs milliards de cellules par lot
- Synthèse de la séquence nucléotidique d’intérêt (si besoin)
- Sous-clonage dans le vecteur d’expression optimisé pour le système cellulaire
- Contrôle par séquençage
- Amplification et contrôles qualité
- Expression pilote : Transfection, suivi de la production de la protéine recombinante.
- Purification pilote par chromatographie d’affinité. (Option : purification en conditions « Endotoxin – free »).
- Contrôles qualité :
- Contrôle de pureté par électrophorèse SDS-PAGE (conditions réductrices et non-réductrices).
- Quantification
- Autres selon le projet : Western blot, …
- Conditionnement et envoi de la protéine recombinante accompagnée du certificat de production.
Go No Go
Expression de protéines recombinantes en système in vitro "cell free" (WGE)
Les avantages de ce système :
- Procédé acellulaire
- Excellente alternative pour l’expression de protéines toxiques pour les cellules
- Expression de protéines solubles ou membranaires
- Meilleur folding des protéines
- Pas d’étape d’optimisation de codons
- Large champ de température : 4 à 30°C
- Système ouvert : possibilité d’ajout de détergents, phospholipides, marqueurs…
- Vecteur optimisé pour ce système acellulaire
- Capacité de production jusqu’à plusieurs mg
Des centaines de constructions réalisées chaque année (protéines membranaires, protéines virales, récepteurs membranaires, gpcr like protéines, …)
- Synthèse de la séquence nucléotidique d’intérêt (si besoin)
- Sous-clonage dans le vecteur d’expression optimisé pour le système cell free.
- Contrôle par séquençage
- Amplification et contrôles qualité.
- Production et purification pilote
- Contrôle des protéines induites sur gel SDS-PAGE
- Contrôle par Western-Blotting (anticorps anti-tag ou anticorps spécifique)
- Dosage protéique
Si besoin : Tests complémentaires d’expression :
- Tests de différentes conditions d’expression
- Tests de solubilisation
Go No Go
Expression de protéines recombinantes en système Levures (P. pastoris, P. cerevisae)
Les avantages de ce système :
- Système post-traductionnel proche de celui des cellules mammifères, incluant glycosylation, phosphorylation, …
- Système adapté pour les protéines complexes
- Sécrétion dans le milieu de culture
- Qualité « endofree »
- Rendement de production élevé
- Un ensemble de tests complémentaires au process standard, pour optimiser le rendement et la qualité des protéines produites et purifiées.
Capacité de production en scale up : de quelques mg jusqu’à plusieurs centaines de mg.
- Synthèse du gène d’intérêt (si besoin)
- Sous-clonage dans le vecteur d’expression. Criblage.
- Contrôle par séquençage.
- Amplification et contrôles qualité
- Test de différentes conditions d’expression (type induction T°C, …).
- Purification par chromatographie d’affinité sur Nickel Agarose (HIS tag)
- Contrôle de la protéine purifiée sur gel SDS-PAGE et dosage par BCA
Go No Go
Capacité de production en scale up : pour des lots recherche (lots de quelques mg jusqu’à plusieurs centaines de mg)
- Production en plus gros volume
- Purification par chromatographie d’affinité sur Nickel Agarose
- Contrôle de la protéine purifiée par électrophorèse sur gel SDS-PAGE et dosage par BCA
- Option : Elimination du tag
- Possibilité de concentration, d’aliquotage, lyophilisation, conjugaison…
- Conditionnement et envoi de la protéine, transport en carboglace, accompagné du rapport
Comparaison entre les 4 systèmes d’expression fournis par RD-Biotech
Le tableau ci-dessous donne une idée générale des avantages des trois systèmes d’expression de protéines hétérologues disponibles chez
RD-Biotech. Les performances indiquées peuvent cependant varier d’une protéine à l’autre.
Services à façon
Études de faisabilité in silico
Service d’expertise et étude de faisabilité in silico : prise en charge du projet incluant une analyse scientifique et technique de la bibliographie, l’étude de configuration de séquences, l’analyse de prédisposition d’expression de la protéine, biologie structurale, afin de proposer la séquence et le système le plus approprié.
Construction de vecteurs
RD-Biotech propose deux alternatives :
- Utilisation de vos vecteurs
- Développement de vos vecteurs d’expression dans nos systèmes optimisés
Autres services
Notre équipe commerciale ainsi que nos experts scientifiques et techniques sont à votre écoute pour vous proposer le service adapté à votre demande.